Лабораторная диагностика сифилиса

Врач КЛД высшей категории Зорич Анжелика Анатольевна

Антигенное строение бледной трепонемы

Наиболее изучены следующие антигены:

- протеиновые антигены бледной трепонемы; имеют в своем составе фракцию, общую для патогенных и непатогенных трепонем, кроме того, имеется фракция, специфичная только для патогенных трепонем, антитела против них появляются в организме в конце инкубационного периода или в течение первой недели после появления твердого шанкра;

- антигены полисахаридной природы; малоиммуногенны, т.к. антитела против них не достигают значительных титров, поэтому роль этих антител в серодиагностике сифилиса незначительна;

- липидные антигены бледной трепонемы; составляют около 30% сухой массы клетки; помимо липидов бледной трепонемы в организме больного появляется большое количество веществ липидной природы в результате разрушения клеток тканей, в основном, липидов митохондриальных мембран; по-видимому, они имеют такое же строение, как и липидные антигены бледной трепонемы и обладают свойствами аутоантигенов; антитела в организме больного пояляются примерно на 5 - 6й неделе после заражения.

Следовательно, сифилитические антитела могут быть неспецифическими (реагины) и специфическими (противотрепонемными). Реагины направлены против липидных антигенов бледной трепонемы и против аутоантигенов, возникающих вследствие деструкции клеток организма. Следует иметь в виду, что реагины обнаруживаются также в нормальных тканях, и их количество повышается при различных физиологических и патологических состояниях. Эти реагины могут быть причиной так называемых биологических ложноположительных серологических реакций на сифилис.

Специфические антитрепонемные антитела, относящиеся к IgM и IgG, направлены против бледной трепонемы и, так же как и антигены трепонемы, могут быть группоспецифичными и видоспецифичными.

Для определения антител в сыворотке крови больного используют различные серологические реакции, отличающиеся друг от друга чувствительностью, специфичностью, сложностью постановки и стоимостью. Учитывая, что все серологические реакции на сифилис в определенных условиях могут быть ложноположительными, их следует ставить в комплексе и, в случае необходимости, в динамике.

Серологические реакции, в зависимости от выявляемых ими антител, подразделяются на группы:

- липидные (реагиновые) реакции неспецифичные, нетрепонемные:

микрореакции на стекле с липидными антигенами - экспресс-метод диагностики (микрореакции преципитации - МРП, VDRL, CMF, RPR и др.); реакция связывания комплемента (РСК) с липидными антигенами - реакция Вассермана; осадочные реакции (реакция преципитации Кана, цитохолевая реакция Закса - Витебского и др.);

- групповые трепонемные реакции групповые и видоспецифичные:

зависят от антигенов, входящих в состав набора: РСК с протеиновым антигеном Рейтера; реакция иммунофлюоресценции (РИФ); реакция иммунного прилипания (РИП); реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ); РИФ Абс. и ее варианты (IgM FTA ABS, 19S IgM FTA ABS, и др.); реакция непрямой гемагглютинации бледных трепонем (РПГА); иммуноблот IgM, IgG.

Различные серологические реакции используются для различных практических целей. При массовых обследованиях населения и при необходимости экстренного выявления сифилиса используются отборочные реакции (VDRL, RPR, МРП и др.) Для диагностики (подтверждения) сифилиса у кардиологических, психоневрологических, офтальмологических пациентов, а также беременных женщин применяют определение суммарных антител IgM, IgG в любой иммунологической реакции (на сегодняшний день - ИФА). С целью контроля за эффективностью терапии рекомендуют VDRL в количественном исполнении или определение IgM в иммунологической реакции (ИФА). В качестве реакции экспертизы в случаях расхождения трепонемных реакций применяют иммуноблот IgM, IgG. В иммуноблоте используется 5 разделенных антигенов: р15, р17, р22, р45 и р47. Из них специфичными являются 4 белка, р22 - неспецифичен. Поэтому наличие полосы р22 имеет принципиальное значение и в ряде случаев объясняет наличие ложноположительного результата. Наличие даже одной специфичной полосы IgM расценивается как положительный результат, наличие одной специфичной полосы IgG - как сомнительный результат, рекомендуется исследование в динамике и иммуноблот IgM.

Прямые трепонемные тесты

- темнопольная микроскопия: бледная трепонема плохо окрашивается традиционными красителями, поэтому используется темнопольный микроскоп. Материал для исследования при первичном сифилисе - это материал из шанкра, при вторичном - из эрозивных папул.

- ПЦР: - при первичном сифилисе можно исследовать материал из шанкра, при вторичном - из эрозивных папул. При раннем вторичном сифилисе в момент первых высыпаний ДНК можно найти в венозной крови. При обычном мазке из влагалища, шейки матки, уретры - бледная спирохета не определяется. Этот метод всегда рекомендован при отрицательных данных темнопольной микроскопии, приеме системных и местных антибактериальных и антисептических препаратов, наличии микст-инфекции (в особенности герпетической).

Какая динамика серологических исследований при сифилисе?

Антилипидные (неспецифические) антитела образуются через 7-14 дней после образования шанкра или через 4-5 недель после инфицирования. Специфические противотрепонемные антитела IgM обнаруживаются в конце второй недели от момента инфицирования. IgG к трепонемным антигенам появляются приблизительно через 4 недели после контакта. Таким образом, к моменту появления клинических симптомов сифилиса (образование твердого шанкра) в сыворотке крови пациентов можно выявить как специфические IgM, так и специфические IgG (суммарные антитела) . Параметры иммунного ответа могут изменяться в результате проводимого лечения. Адекватное лечение раннего сифилиса приводит к быстрому снижению титров неспецифических антител и специфических IgM, при этом специфические IgG обычно сохраняются в сыворотке крови в течение длительного периода времени, а иногда и всю жизнь.

												РИБТ пол
				противотрепонемные lgG пол. (ИФА, иммуноблот)
			противотрепонемные lgМ пол. (ИФА, иммуноблот)
							реагины (lgМ + lgG) пол. MOP, RPR, VDRL
						лимфаденит					полиаденит
инк. период				шанкр							первичная розеола
нед	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14	15

Ложноположительные серологические реакции на сифилис

В случаях ложноположительных серологических реакций в сыворотке крови обследуемых людей имеются только реагины, но отсутствуют специфичные антигены и антитела.

Различают следущие группы состояний:

- инфекционные заболевания, возбудители которых имеют антигенное сходство с бледной трепонемой (возвратный тиф, фрамбезия, беджель, пинта, лептоспироз, воспалительные процессы, обусловленные трепонемами, сапрофитирующими в полости рта и на половых органах);

-физиологические и патологические состояния, приводящие к изменению обмена веществ, особенно липидного (беременность, подагра, сыпной тиф, малярия, пневмония, лепра, эндокардит, диффузные болезни соединительной ткани, инфаркт миокарда, сотрясение мозга, искусственная иммунизация, онкологические заболевания, отравление свинцом, фосфором, хлороформом, прием сацилата натрия, дигиталиса и пр.);

- технические погрешности при постановке реакций.

Различают острые и хронические ложноположительные реакции. Острые ложноположительные реакции не стойки и их спонтанная негативация происходит в течение 4 - 6 месяцев. Хронические реакции сохраняются положительными более 6 месяцев.

Причинами острых биологически ложноположительных реакций являются беременность (особенно в последние недели ее и в первые 10 дней после родов), воспаление легких, в частности микоплазменной этиологии, корь, энтеровирусная инфекция, инфекционный мононуклеоз, вакцинация, наркомания, алкоголизм. Реже они наблюдаются при активном туберкулезе, скарлатине, вирусной пневмонии, бруцеллезе, риккетсиозах, лептоспирозе, кори, венерической лимфогранулеме, малярии, белковом голодании.

У больных, прекративших принимать наркотики, ложноположительные серологические реакции на сифилис сохраняются до 14 месяцев. Иногда причинами неспецифических серологических реакций бывают обширные травмы, сотрясение мозга, переломы, инфаркт миокарда, а также технические погрешности при постановке реакций.

Хронические ложноположительные стандартные серологические реакции могут наблюдаться у больных лепрой, системной красной волчанкой, тиреоидитом Хашимото, ревматизмом, узелковым периартериитом, циррозом печени, саркоидозом, генерализованной склеродермией, криоглобулиновой пурпурой, злокачественными опухолями, малярией, туберкулезом, бруцеллезом, лептоспирозом, инфекционным мононуклеозом, сахарным диабетом, болезнями крови, гипертонической болезнью, хроническим алкоголизмом и наркоманией. С возрастом количесво ложноположительных результатов увеличивается. У женщин они наблюдаются в 4,5 раза чаще, чем у мужчин. Иногда причины ложноположительных реакций остаются неясными (идиопатические реакции) или они наблюдаются спонтанно в некоторых семьях.

Неспецифические серологические реакции составляют в среднем 0,03 - 2,5 %. Чаще бывают слабоположительными, а если положительными, то с низким титром сифилитических реагинов. При некоторых заболеваниях (лимфомах, хроническом лимфолейкозе, ревматоидном артрите, раке печени) титр их, однако, может быть высоким. При повторном исследовании неспецифические реакции становятся отрицательными или выраженность их снижается, в то время как титр сывороток больных сифилисом остается таким же или нарастает.

При неспецифических результатах наблюдаются расхождения нескольких реакций. Иногда отмечается несовпадение результатов реакций при постановке ее с разными антигенами: c одним антигеном получают положительные результаты, с другим - отрицательные. В случае резкого расхождения исследования надо повторить с новой порцией крови, но не раньше, чем через неделю. Наиболее достоверным критерием истинно сифилитических показаний классических серологических реакций является результат, полученный при исследовании крови с помощью иммуноблота IgM, IgG.

Особенность диагностики сифилиса в "Евромеде"

Неспецифичные реагины определяются RPR тестом с кардиолипиновым антигеном с добавкой угольных частиц. Производитель: HUMAN, Германия.

Серологическая диагностика сифилиса проводится методом иммунохемилюминесценции, при этом определяются суммарные антитела IgM и IgG к специфичным трепонемным антигенам р15, р17, р47 - это такой суммарный мини иммуноблот! Чувствительность и специфичность тест системы более 99%. Производитель ABBOT , Германия.